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LZCap®AG(3'Acm)

货号 HN3004
分子式 C35H48N16O24P4(游离酸)
分子量 1200.75(游离酸)
纯度 HPLC≥95%
浓度 100mM
规格 100 μL1 mL
盐型 NH4+
保存 -20°C及以下保存


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产品描述:LZCap®AG(3'Acm)是一种Cap1类似物,可以作为mRNA共转录加帽试剂,在T7聚合酶作用下,利用LZCap®AG(3'Acm)、NTPs以及模板DNA共转录产生带5’端Cap 1结构的mRNA,加帽后的mRNA能直接在细胞和体内翻译表达。广泛应用于体外转录、基因编辑、疫苗研发、肿瘤CAR-T治疗、蛋白代替疗法以及再生医学等领域。

LZCap®AG(3'Acm)需要T7启动子以AG作为起始序列,LZCap®AG(3'Acm)的加帽率可达97%,1μg起始模板量转录产生100-200μg mRNA。

分子式:C35H48N16O25P4(游离酸)

分子量:1200.75(游离酸)

CAS号:/

浓  度:100 mM

规  格:100 μL、1 mL

纯  度:HPLC ≥95%

盐  型:NH4+

结  构:

HN3004-1.png

保存:-20°C及以下保存。


LZCap®的DNA模板设计


        LZCap® AG适用于AG起始的序列,T7启动子(下划线)后接AG序列能够有效起始转录。

AG起始序列.png

           5’   TAATACGACTCACTATA AG GNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 3’

3’ ATTATGCTGAGTGATAT TC CNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 5’

                                            

                                                               T7聚合酶转录+LZCap® AG

                                            

                                      5’ GAGGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 3’

实验流程


1. 在冰上解冻实验所需的组分。

2. 参考以下反应体系室温配置转录体系。


组分

体积(μL

终浓度

ATP(100mM)

1

5mM

UTP(100mM)

1

5mM

CTP(100mM)

1

5mM

GTP(100mM)

1

5mM

LZCap® AG(3'Acm) (100mM)

0.8

4mM

10×Transcription Buffer

2

Recombinant RNase Inhibitor(40U/μL)

0.5

1U/μL

Pyrophosphatase(0.1U/μL)

0.4

0.002U/μL

T7 RNA polymers(250U/μL)

0.64

8U/μL

Linear DNA+RNase Free Water

11.66

1μg

终体积

20μL


为了进一步降低mRNA的免疫原性,恒诺康还可以为您提供修饰核苷酸N1-Me-pUTP(N1-甲基假尿苷三磷酸)(货号:HN1002)用来代替UTP参与转录反应。

备注:

1)     LZCap® AG (3'Acm)适用于以5’AG 3’起始序列的T7启动子转录载体,在载体构建时需要加以考虑。

2)     实验所用的试剂耗材和容器等无RNase污染。

3)     建议使用线性化的DNA模板进行转录。

4)     使用修饰核苷酸代替野生型核苷酸时,反应终浓度不变。

5)     若使用PCR产物作为转录起始模板,DNA模板量可以减少一半。

3. 将配置好的反应液混匀,短暂离心后,置于37℃孵育2-3小时。若转录本长度小于 100nt,增加反应时间至 4-8 h。