LZCap® AG(3'Acm)
- 产品货号:HN3004
产品描述:LZCap® AG (3'Acm)是一种Cap1类似物,可以作为mRNA共转录加帽试剂,在T7聚合酶作用下,利用LZCap® AG (3'Acm)、NTPs以及模板DNA共转录产生带5’端Cap 1结构的mRNA,加帽后的mRNA能直接在细胞和体内翻译表达。广泛应用于体外转录、基因编辑、疫苗研发、肿瘤CAR-T治疗、蛋白代替疗法以及再生医学等领域。
LZCap® AG (3'Acm)需要T7启动子以AG作为起始序列,LZCap® AG (3'Acm)的加帽率可达97%,1μg起始模板量转录产生100-200μg mRNA。
分子式:C35H48N16O24P4(游离酸)
分子量:1200.75(游离酸)
CAS号:/
浓 度:100 mM
规 格:100 μL/支、1 mL/支
纯 度:HPLC ≥95%
盐 型:NH4+
结 构:
保存:-20°C及以下保存。
为了进一步降低mRNA的免疫原性,恒诺康还可以为您提供修饰核苷酸N1-Me-pUTP(N1-甲基假尿苷三磷酸)(货号:HN1002)用来代替UTP参与转录反应。
备注:
1) LZCap® AG (3'Acm)适用于以5’AG 3’起始序列的T7启动子转录载体,在载体构建时需要加以考虑。
2) 实验所用的试剂耗材和容器等无RNase污染。
3) 建议使用线性化的DNA模板进行转录。
4) 使用修饰核苷酸代替野生型核苷酸时,反应终浓度不变。
5) 若使用PCR产物作为转录起始模板,DNA模板量可以减少一半。
3. 将配置好的反应液混匀,短暂离心后,置于37℃孵育2-3小时。若转录本长度小于 100nt,增加反应时间至 4-8 h。
转录产量
荧光素酶基因作为DNA模板,体外转录后,通过琼脂糖电泳和NanoDrop分光光度计检测荧光素酶mRNA的完整性和产量。LZCap® AG封顶的mRNA产量高达200μg,每个标准IVT反应的DNA模板为1μg。
细胞表达
转录所得包含luciferase基因的mRNA转染293T细胞,检测荧光值,判断mRNA的翻译表达情况。检测结果显示LZCap® AG(3'Acm)加帽的mRNA细胞表达是市售Cap 1类似物的2-3倍。
RNase 检测
RNase检测基于高度敏感和特异的RNase探针底物,它与活性RNase反应并释放荧光。在阳性对照中检测到表明存在RNase的荧光。在LZCap®样品中没有检测到荧光,表明没有RNase污染。
加帽率检测
共转录加帽后的mRNA样品用RNaseH进行处理,纯化后上LC-MS检测加帽率,LZCap加帽率≥97%。
细胞毒性检测
高浓度2μM(常规实验的~700倍)的帽子类似物对293T体现出4-18%的毒性率、对Huh-7体现出2-12%的毒性率,而在较低的浓度下则无法检测到细胞毒性。LZCap® AG(3'Acm)安全性与市售Cap 1类似物相当。