LZCap^® AG(3'Acm)
- 产品货号：HN3004

产品描述：LZCap^® AG (3'Acm)是一种Cap1类似物，可以作为mRNA共转录加帽试剂，在T7聚合酶作用下，利用LZCap^® AG (3'Acm)、NTPs以及模板DNA共转录产生带5’端Cap 1结构的mRNA，加帽后的mRNA能直接在细胞和体内翻译表达。广泛应用于体外转录、基因编辑、疫苗研发、肿瘤CAR-T治疗、蛋白代替疗法以及再生医学等领域。

LZCap^® AG (3'Acm)需要T7启动子以AG作为起始序列，LZCap^® AG (3'Acm)的加帽率可达97%，1μg起始模板量转录产生100-200μg mRNA。

分子式：C₃₅H₄₈N₁₆O₂₄P₄（游离酸）

分子量：1200.75（游离酸）

CAS号：/

浓  度：100 mM

规  格：100 μL/支、1 mL/支

纯  度：HPLC ≥95%

盐  型：NH₄⁺

结  构：

保存：-20°C及以下保存。

     为了进一步降低mRNA的免疫原性，恒诺康还可以为您提供修饰核苷酸N1-Me-pUTP（N1-甲基假尿苷三磷酸）（货号：HN1002）用来代替UTP参与转录反应。

          备注：

1)     LZCap^® AG (3'Acm)适用于以5’AG 3’起始序列的T7启动子转录载体，在载体构建时需要加以考虑。

2)     实验所用的试剂耗材和容器等无RNase污染。

3)     建议使用线性化的DNA模板进行转录。

4)     使用修饰核苷酸代替野生型核苷酸时，反应终浓度不变。

5)     若使用PCR产物作为转录起始模板，DNA模板量可以减少一半。

3． 将配置好的反应液混匀，短暂离心后，置于37℃孵育2-3小时。若转录本长度小于 100nt，增加反应时间至 4-8 h。

转录产量

荧光素酶基因作为DNA模板，体外转录后，通过琼脂糖电泳和NanoDrop分光光度计检测荧光素酶mRNA的完整性和产量。LZCap^® AG封顶的mRNA产量高达200μg，每个标准IVT反应的DNA模板为1μg。

细胞表达

转录所得包含luciferase基因的mRNA转染293T细胞，检测荧光值，判断mRNA的翻译表达情况。检测结果显示LZCap® AG(3'Acm)加帽的mRNA细胞表达是市售Cap 1类似物的2-3倍。

RNase 检测

  RNase检测基于高度敏感和特异的RNase探针底物，它与活性RNase反应并释放荧光。在阳性对照中检测到表明存在RNase的荧光。在LZCap®样品中没有检测到荧光，表明没有RNase污染。

加帽率检测

共转录加帽后的mRNA样品用RNaseH进行处理，纯化后上LC-MS检测加帽率，LZCap加帽率≥97%。

细胞毒性检测

高浓度2μM(常规实验的~700倍)的帽子类似物对293T体现出4-18%的毒性率、对Huh-7体现出2-12%的毒性率，而在较低的浓度下则无法检测到细胞毒性。LZCap^® AG(3'Acm)安全性与市售Cap 1类似物相当。